Sistemas de coagulação - evolução - 1

A evolução da coagulação do sangue de vertebrados

Kenneth R. Miller - pt.wikipedia.org - Originalmente em: www.millerandlevine.com - Clotting

“Matuto” Imitador 

O sistema de coagulação humano se presta ao mesmo tipo de análise? Em sua essência, o mecanismo real de coagulação é notavelmente simples. Uma proteína fibrosa e solúvel chamada fibrinogênio ("fabricante de coágulos") compreende cerca de 3% da proteína no plasma sanguíneo. O fibrinogênio tem uma porção pegajosa perto do centro da molécula, mas a região pegajosa é coberta por pequenas cadeias de aminoácidos com cargas negativas. Como cargas semelhantes se repelem, essas cadeias mantêm as moléculas de fibrinogênio separadas. 

Quando um coágulo se forma, uma enzima protease (que corta proteínas) corta as cadeias carregadas. Isso expõe as partes pegajosas da molécula e, de repente, os fibrinogênios (que agora são chamados de fibrinas) começam a se unir, iniciando a formação de um coágulo.

A protease que corta as cadeias carregadas é chamada de trombina. Assim, assim como o sistema de coagulação da lagosta, o coração da reação envolve apenas duas moléculas: fibrinogênio e trombina. Mas, ao contrário da lagosta, há muito mais nesta máquina. Acontece que a própria trombina existe em uma forma inativa chamada protrombina. Portanto, assim como o fibrinogênio, precisa ser ativado antes de iniciar o processo de coagulação. O que ativa a protrombina? Aqui é onde a vida fica realmente interessante. A protrombina, uma protease em si, é ativada por outra protease chamada Fator X, que corta parte da proteína inativa para produzir trombina ativa, formadora de coágulos. OK, então o que ativa o Fator X? Acredite ou não, ainda existem mais proteases, duas delas, na verdade, chamadas Fator VII e Fator IX, que podem ativar o Fator X. O que as ativa? Aqui é onde um bom professor vai ao quadro-negro, e eu também irei:

Agora, "beleza" é uma palavra que a maioria das pessoas não pensaria em colocar na mesma frase com "bioquímica", mas a bioquímica desse caminho é realmente linda. Comece na parte inferior, com a conversão do fibrinogênio solúvel em fibrina formadora de coágulos. Ao olhar para cima, você pode traçar esse processo para um de dois estímulos externos diferentes, ambos fazendo sentido. No canto superior esquerdo, o caminho pode ser iniciado com danos na superfície de uma célula, algo que acontece sempre que o sangue é exposto ao ar ou a um objeto estranho na superfície de uma ferida. No canto superior direito, o fator tecidual, uma proteína solúvel encontrada na maioria dos tecidos, mas não na corrente sanguínea, ativa a via. É aqui que a coagulação começa a partir de uma hemorragia interna, um vaso quebrado dentro dos tecidos do corpo. Assim, ambos os estímulos finais levam ao mesmo conjunto de proteínas formadoras de coágulos (Fator X, trombina e fibrina), mas nenhum deles o faz diretamente. Em vez disso, cada um ativa uma "cascata" de fatores intermediários, quase todos proteases, que eventualmente ativam a formação de coágulos.

Com certeza parece bonito, mas por que uma cascata? Por que não poderíamos ter um caminho mais simples, como a lagosta, onde algo como fator tecidual ativou a coagulação diretamente? Bem, poderíamos, mas um caminho complexo, mesmo que leve os estudantes de bioquímica à distração, tem suas próprias vantagens. Por um lado, as várias etapas da cascata amplificam o sinal desse primeiro estímulo. Se uma única molécula ativa do Fator XII pudesse ativar, digamos, 20 ou 30 moléculas do Fator XI, então cada nível da cascata multiplicaria os efeitos de um sinal inicial. Coloque 5 ou 6 passos na cascata e você amplificou um sinal bioquímico mais de um milhão de vezes. A coagulação com menos passos ainda funcionaria, mas levaria mais tempo para produzir um coágulo substancial e responderia muito menos a lesões menores. 

Michael Behe está maravilhado com a intrincada complexidade deste sistema, e eu também. E ele também está correto ao apontar que se retirarmos parte deste sistema, estaremos em apuros. Os hemofílicos, por exemplo, são incapazes de sintetizar a forma ativa do Fator VIII. Isso significa que eles são incapazes de completar a etapa final de uma das vias, e é por isso que a hemofilia às vezes é conhecida como doença do sangramento. Defeitos ou deficiências em qualquer um dos outros fatores são igualmente graves. Não há dúvida sobre isso - a coagulação é uma função essencial e não é algo para se mexer. Mas isso também significa que não poderia ter evoluído? De jeito nenhum. A chave para entender a evolução desse intrincado sistema, como Russell Doolittle apontou, é o fato de que os fatores de coagulação compartilham uma semelhança requintada e reveladora.

Construindo a Máquina

Parafraseando Darwin, a noção de que a evolução poderia ter produzido um sistema tão intrincado quanto a cascata de coagulação do sangue parece, podemos confessar livremente, "absurda no mais alto grau possível". Isso é especialmente verdade se você acredita, como Behe parece acreditar, que a coagulação não é possível até que toda a cascata de fatores seja reunida.

Mas já sabemos que a evolução não começa do zero e não precisa de sistemas totalmente montados para funcionar. Lembre-se do sistema de lagosta como exemplo. A coagulação do sangue evoluiu a partir de duas proteínas pré-existentes, normalmente encontradas em compartimentos separados do corpo, que tiveram uma interação fortuita quando danos a um vaso sanguíneo as uniram. Uma vez que essa interação foi estabelecida, a seleção natural fez o resto.  

Poderia algo assim ter acontecido aqui?   

Lembre-se, não estamos começando do nada. Estamos começando cerca de 600 milhões de anos atrás em um pequeno pré-vertebrado. com um sistema circulatório de baixo volume e baixa pressão. Assim como qualquer pequeno inverterbrado com sistema circulatório, nosso organismo ancestral teria um conjunto completo de células brancas pegajosas para ajudar a tapar vazamentos. Além disso, esse sistema ancestral teria outra coisa. Na maioria das vezes, a hemorragia começa com lesão celular, o que significa que as células são quebradas nas proximidades de uma ferida e seu conteúdo é despejado. Isso significa, entre outras coisas, que todas as moléculas sinalizadoras internas de uma célula são subitamente derramadas no sistema vascular danificado. Incluído entre o conteúdo está uma enorme quantidade de moléculas de sinalização interna, incluindo as proeminentes como o monofosfato de adenosina cíclico (abreviado: AMPc), todos despejados no tecido ao redor de uma ferida.

Por que um jorro repentino de AMPc em uma ferida seria significativo? Bem, acontece que os vertebrados usam o AMPc como uma molécula sinalizadora para controlar as contrações das células musculares lisas, o mesmo tipo de células musculares que circundam os vasos sanguíneos. Portanto, a liberação de AMPc interno de células rompidas automaticamente faria com que os músculos lisos ao redor de um vaso quebrado se contraíssem, limitando o fluxo sanguíneo e tornando mais provável que os próprios glóbulos brancos pegajosos do sangue fossem capazes de tapar o vazamento. Isso significa que já temos alguma capacidade de limitar danos e tapar vazamentos em um sistema primitivo de baixa pressão. Não é um mau lugar para começar. 

Nosso próximo passo é considerar a natureza do próprio sangue. Por razões relacionadas à pressão osmótica, a tendência da água de se mover através das membranas celulares, o plasma sanguíneo é uma solução viscosa e carregada de proteínas. E também é importante notar que o ambiente extracelular do tecido comum é muito diferente do sangue. Esses espaços são carregados com sinais de proteínas, moléculas de matriz insolúveis e proteases extracelulares que cortam e aparam essas moléculas em suas formas e tamanhos finais. De fato, tais proteases constituem uma das principais formas de sinalização extracelular. Assim, os tecidos de nosso vertebrado ancestral seriam carregados com enzimas de corte de proteínas por razões completamente alheias à coagulação. 

Tendo tudo isso em mente, o que aconteceria quando um vaso sanguíneo se rompesse em tal organismo? 

Bem, o plasma rico em proteínas flui para um ambiente desconhecido, e os glóbulos brancos pegajosos rapidamente "grudam" nas fibras da matriz extracelular. As proteases teciduais, muito acidentalmente, são agora expostas a uma nova gama de proteínas e cortam muitas delas em pedaços. A solubilidade desses novos fragmentos varia. Algumas são mais solúveis do que as proteínas plasmáticas das quais foram extraídas, mas muitas são muito menos solúveis. O resultado é que aglomerados de fragmentos de proteínas recém-insolúveis começam a se acumular na interface tecido-plasma, ajudando a selar a ruptura e formando um coágulo muito primitivo. (Alguém poderia objetar que isso é muito primitivo e muito inespecífico para funcionar? Que não seria suficiente para selar quebras? Bem, acontece que você não pode fazer essa objeção pela simples razão de que esse é praticamente o mecanismo de coagulação usado hoje por um grande número de invertebrados. Funciona para eles e, portanto, não há razão para que também não funcione para os ancestrais dos vertebrados de hoje!) 

Agora vamos ao que interessa. Uma mutação duplica um gene existente para uma serina protease, uma enzima digestiva produzida no pâncreas. As duplicações de genes acontecem o tempo todo, e geralmente são de tão pouca importância que são conhecidas como mutações "neutras", não tendo nenhum efeito sobre a aptidão de um organismo. No entanto, o gene original tinha uma região de controle que o ativava apenas no pâncreas. Durante a duplicação, a região de controle da duplicata é danificada, de modo que o novo gene é ativado tanto no pâncreas quanto no fígado. Como resultado, a forma inativa da enzima, um zimogênio, é liberada na corrente sanguínea.

NdT: Esse ponto de duplicação de genes produzindo novas funções é fundamental na argumentação contra a falácia da “ratoeira irredutível” de Behe para os sistemas do maquinário celular apresentado por Orr, em mecanismos propostos inicialmente por Hermann Joseph Muller. Destaque-se:

“Em outras palavras, em algum ponto do tempo uma cópia extra de um gene foi feito. A cópia não era essencial, o organismo tem vivido, obviamente, muito bem sem ele. Mas com o tempo esta cópia modificada, pegando uma nova função e, muitas vezes relacionada. Depois de mais evolução, este gene duplicado terá se tornado essencial. (Nós estamos carregados de duplicação de genes que são necessários: a mioglobina, por exemplo, que carrega oxigênio nos músculos, está relacionado com a hemoglobina, que transporta o oxigênio no sangue, e ambos são necessários..) A história de duplicação de genes, que podem ser encontrados em cada texto sobre evolução é apenas um caso especial da teoria de Muller. Mas é um caso extremamente importante: ele explica como surgem novos genes e, assim, finalmente, como são construídas as rotas bioquímicas.” - Refutações ao Design Inteligente - Scientia - sites.google.com  

Isso não causa nenhum problema para o organismo - a maioria das proteases pancreáticas é inativa até que um pequeno pedaço próximo a seus sítios ativos possa ser cortado por outra protease. No entanto, quando o dano a um vaso sanguíneo permite que o plasma penetre no tecido, de repente nossa serina protease plasmática anteriormente inativa é ativada por proteases teciduais, aumentando a atividade geral de corte de proteína no local da hemorragia. A coagulação do sangue é aprimorada, então nosso gene duplicado (com a proteína errada) agora é favorecido pela seleção natural. 

Esse gene da protease plasmática está agora sujeito à mesma mistura de erros de cópia, rearranjos e rearranjos genéticos que afetam os genes de todas as outras proteínas celulares. Com o tempo, pedaços e pedaços de outros genes são acidentalmente emendados na sequência da protease plasmática. Como o valor seletivo da protease plasmática é muito baixo (não ajuda muito na coagulação), a maioria dessas mudanças faz pouca diferença. Mas um dia, por meio de um processo bem conhecido chamado "embaralhamento de exon", uma sequência de DNA conhecida como "domínio EGF" é emendada em uma extremidade do gene da protease. EGF significa fator de crescimento epidérmico (NdT: epidermal growth factor), uma pequena proteína usada por células em todo o corpo para sinalizar outras células. O EGF é tão comum que quase todas as células do tecido têm "receptores" para ele. Esses receptores são proteínas de superfície celular moldadas de tal forma que se ligam firmemente ao EGF.

A combinação fortuita de uma sequência EGG com a protease plasmática muda tudo. 

Em um piscar de olhos, o tecido ao redor de um vaso sanguíneo rompido está agora repleto de receptores que se ligam à nova sequência de EGF em nossa protease sérica. Como resultado, altas concentrações da protease circulante se ligam diretamente às superfícies das células próximas a uma ferida. As proteases são ativadas da mesma maneira, mas agora suas atividades proteolíticas são altamente localizadas. A produção de um coágulo de fragmentos de proteínas insolúveis é agora mais rápida e mais específica do que nunca. Organismos com a nova EGF-protease podem coagular seu sangue muito mais rapidamente do que antes e, portanto, são favorecidos pela seleção natural. Para enfatizar seu papel no processo de coagulação, essa proteína da superfície celular com o receptor de EGF é chamada de Fator Tecidual (FT).

O que acontece depois? Bem, lembre-se do caso da lagosta em que uma duplicata de uma proteína circulante (vitelogenina) se especializou para produzir uma proteína formadora de coágulos (fibrinogênio de lagosta)? Uma vez que tenhamos uma situação em que toda hemorragia ativa uma protease ligada a receptores teciduais, uma duplicata de um gene de uma das principais proteínas plasmáticas estaria sob forte pressão seletiva para aumentar sua capacidade de interagir com a protease ligada. O fibrinogênio, a proteína solúvel que agora é o alvo primário da proteólise na cascata de coagulação, surgiu claramente dessa maneira. A seleção natural favoreceria toda e qualquer mutação ou rearranjo que aumentasse a sensibilidade do fibrinogênio à protease plasmática, aumentando drasticamente a capacidade da nova protease de formar coágulos específicos de proteína insolúvel.

Não há dúvida de que essas três etapas, cada uma apoiada por mecanismos Darwinianos clássicos, teriam sido suficientes para moldar um sistema de coagulação rudimentar. Isso nos deixaria com um sistema no qual o plasma circulante contém tanto uma serina protease inativa quanto seu alvo de fibrinogênio. A protease seria ativada pelo contato com o fator tecidual, e a protease ativa, por sua vez, clivaria locais sensíveis no fibrinogênio para formar um coágulo. Esse sistema não seria tão rápido, responsivo ou sensível quanto o atual sistema de coagulação de vertebrados, mas funcionaria um pouco melhor do que o sistema que o precedeu, e isso é tudo que a evolução exige.

Adicionando complexidade 

Poderia a evolução pegar esse sistema rudimentar e produzir uma cascata de fatores em várias camadas? Apenas observe. A maioria das serina proteases, incluindo tripsina e trombina, são autocatalíticas. Isso significa que, até certo ponto, eles podem se ativar, em muitos casos clivando alguns aminoácidos para ativar seus sítios ativos. Assim, poderíamos diagramar as funções reais de nossa protease plasmática ancestral (que chamaremos de protease A) assim: 

NdT: Imagem original:

Como vimos, a forma inativa da protease (A) é alterada para a forma ativa (A*) quando duas coisas acontecem: está ligada ao fator tecidual (FT) e é ativado por proteases teciduais, incluindo nossa própria protease (essa é a parte autocatalítica). Isso significa - e isso é importante - que nossa protease está realmente envolvida no corte de duas coisas: o fibrinogênio, e também ele próprio, convertendo a proteína precursora inativa de A em A*. 

Agora, vamos supor que ocorra uma duplicação gênica no gene da nossa protease, produzindo uma nova versão (B) do gene:

NdT: Imagem original:

  

De repente, a capacidade de A de se ligar a FT torna-se muito menos importante. Se B puder saturar todos os sítios de ligação de FT disponíveis (em virtude de seu domínio EGF), então a ativação de B mediada por FT, combinada com a afinidade de B por A, resultará em uma rápida ativação de A, produzindo bastante A ativado para converter fibrinogênio em fibrina coagável. Parece bom. Mas por que a seleção natural favoreceria uma mutação como essa no sítio ativo de B? Simples: aumentaria a eficiência do processo de coagulação produzindo uma cascata de 2 níveis. Olhe atentamente e você verá que nosso sistema de coagulação de 1 etapa exigia uma interação direta com o FT para ativar cada protease. O novo sistema de 2 etapas permite que cada FT ative uma protease B, cada uma das quais, por sua vez, pode ativar pontuações ou centenas de A's. Com tantas proteases mais ativas na vizinhança da lesão, a coagulação agora pode ocorrer mais rapidamente, aumentando as chances de sobreviver a uma hemorragia. Exatamente o tipo de coisa que a seleção natural favorece.

Dê um passo para trás por um segundo e pense sobre o que acabamos de ver. Uma simples duplicação de genes prepara o terreno para a seleção de mutações no sítio ativo que melhorariam drasticamente o processo de coagulação. As duplicações de genes são mutações neutras, do tipo que ocorrem o tempo todo e, portanto, com tempo suficiente, são altamente prováveis. Uma vez que a duplicação tenha ocorrido, qualquer mutação no sítio ativo que mude as preferências do sítio ativo na direção que mencionei será fortemente favorecida. E isso significa que um verdadeiro sistema de 2 etapas evoluirá muito rapidamente.  

Dois pontos adicionais devem ser mencionados. A primeira é óbvia. Se a duplicação do gene e a subsequente mutação da protease duplicada podem transformar um sistema de 1 etapa em um de 2 etapas, elas certamente podem transformar um sistema de 2 etapas em um de 3 etapas. Isso significa que os aumentos na complexidade bioquímica não são apenas acomodados pela teoria evolucionária, eles são realmente previstos por ela. O segundo ponto é um pouco mais sutil. Os estágios iniciais na evolução de um sistema de formação de coágulos não funcionam muito bem. Mas à medida que o sistema começa a funcionar melhor, à medida que aumenta em complexidade e eficiência, começa a representar um perigo para o organismo. Esse perigo, simplesmente, é que a coagulação pode sair do controle. À medida que a cascata de formação de coágulos evolui cada vez mais, há uma chance de que um pequeno estímulo inicie uma reação que possa fazer com que todo o sangue de um organismo coagule, ou pelo menos o suficiente para causar sérios problemas. A evolução também tem uma resposta para isso? 

Bem, acontece que sim. Primeiro, tenha em mente que um sistema de coagulação primitivo, adequado para um animal com pressão baixa e fluxo sanguíneo mínimo, não tem a capacidade de coagulação para apresentar esse tipo de ameaça. Mas assim que o coágulo ocasional se torna grande o suficiente para apresentar riscos à saúde, a seleção natural favorece a evolução dos sistemas para manter a formação do coágulo sob controle. E de onde viriam esses sistemas? De proteínas pré-existentes, claro, duplicadas e modificadas. Os tecidos do corpo produzem uma proteína conhecida como a1-antitripsina que se liga ao sítio ativo das serina proteases encontradas nos tecidos e as mantém sob controle. Assim, logo que os sistemas de coagulação se tornassem fortes o suficiente, a duplicação de genes apresentaria a seleção natural com um inibidor de protease funcional que poderia então evoluir para antitrombina, um inibidor semelhante que hoje bloqueia a ação da protease primária de clivagem do fibrinogênio, a trombina. 

De maneira semelhante, o plasminogênio, o precursor de uma poderosa proteína de dissolução de coágulos agora encontrada no plasma, teria sido gerado a partir de duplicatas de genes de proteases existentes, assim que se tornou vantajoso desenvolver a capacidade de dissolução de coágulos.  

Em suma, a chave para entender a evolução da coagulação do sangue é perceber que o sistema atual não evoluiu de uma só vez. Como todos os sistemas bioquímicos, evoluiu de genes e proteínas que originalmente serviam a diferentes propósitos. As poderosas pressões oportunistas da seleção natural recrutaram progressivamente uma duplicação genética após a outra, gradualmente moldando um sistema no qual a alta eficiência da coagulação sanguínea controlada tornou possível o sistema circulatório dos vertebrados modernos.  

Minerando o Passado Bioquímico

Podemos saber com certeza que foi assim que a coagulação do sangue (ou qualquer outro sistema bioquímico) evoluiu? A resposta estrita, é claro, é que não podemos. O melhor que podemos esperar de nossos ancestrais vertebrados são fósseis que preservam pedaços de sua forma e estrutura, e pode parecer que sua bioquímica se perderia para sempre. Mas isso não é bem verdade. Os organismos de hoje são descendentes desse passado biológico (e bioquímico) e oferecem uma oportunidade perfeita para testar essas ideias. 

Mesmo um esquema geral, como o que acabei de apresentar, leva a uma série de previsões muito específicas, cada uma das quais pode ser testada. Primeiro, o esquema em si é baseado no uso de pistas bioquímicas bem conhecidas. Por exemplo, a maioria das enzimas envolvidas na coagulação são serina proteases, enzimas de corte de proteínas assim chamadas devido à presença de uma serina altamente reativa em seus sítios ativos, o negócio da proteína. Agora, que órgão produz muitas serina proteases? O pâncreas, é claro, que libera serina proteases para ajudar a digerir os alimentos. O pâncreas, como se vê, compartilha uma origem embrionária comum com outro órgão: o fígado. E, não surpreendentemente, todas as proteases de coagulação são produzidas no fígado. Então, para "colocar" uma protease mascarada no soro, tudo o que precisamos é de uma duplicação de genes que é ativada no órgão "irmão" do pâncreas. Simples, razoável e apoiado pela evidência. 

Em seguida, se a cascata de coagulação realmente evoluiu da maneira que sugeri, as enzimas de coagulação teriam que ser quase duplicatas de uma enzima pancreática e umas das outras. Como se vê, elas são.  Não só a trombina é homóloga à tripsina, uma serina protease pancreática, mas as 5 proteases de coagulação (protrombina e Fatores IX, X, XI e VII) também compartilham extensa homologia.  Isso é consistente, é claro, com a noção de que eles foram formados por duplicação de genes, exatamente como sugerido. Mas há mais do que isso. Poderíamos pegar um organismo, humanos por exemplo, e construir uma "árvore" ramificada com base nos graus relativos de semelhança e diferença entre cada uma das cinco proteases de coagulação.  Agora, se as duplicações de genes que produziram a cascata de coagulação ocorreram há muito tempo em um vertebrado ancestral, devemos ser capazes de pegar qualquer outro vertebrado e construir uma árvore semelhante na qual as relações entre as cinco proteases de coagulação correspondam às relações entre as proteases humanas. Este é um teste poderoso para o nosso pequeno esquema porque requer que as sequências ainda não descobertas correspondam a um padrão específico. E, como sabe qualquer um que tenha acompanhado o trabalho no laboratório de Doolittle ao longo dos anos, é também um teste que a evolução passa em um organismo após o outro.  

Existem muitos outros testes e previsões que também podem ser impostos ao esquema, mas um dos mais ousados foi feito pelo próprio Doolittle há mais de uma década. Se o gene moderno do fibrinogênio realmente foi recrutado de um gene ancestral duplicado, um que não tem nada a ver com a coagulação do sangue, então deveríamos ser capazes de encontrar um gene semelhante ao fibrinogênio em um animal que não possui a via de coagulação dos vertebrados. Em outras palavras, devemos ser capazes de encontrar uma proteína de fibrinogênio não coagulante em um invertebrado. Essa é uma previsão muito ousada, porque se não pudesse ser encontrada, colocaria em dúvida todo o esquema evolutivo de Doolittle.  

Não se preocupe. Em 1990, Xun Yu e Doolittle ganharam sua própria aposta, encontrando uma sequência semelhante ao fibrinogênio no pepino do mar, um equinodermo. O gene do fibrinogênio de vertebrados, assim como os genes das demais proteínas da sequência da coagulação, foi formado pela duplicação e modificação de genes pré-existentes. 

Referências

Doolittle, R. F., (1993) "The evolution of vertebrate blood coagulation: A case of yin and yang," Thrombosis and Haemostasis 70: 24-28.

Doolittle, R. F., and Feng, D. F., (1987) "Reconstructing the evolution of vertebrate blood coagulation from a consideration of the amino acid sequences of clotting proteins," Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology 52: 869-874.

Doolittle, R. F., and Riley, M. (1990) "The amino-acid sequence of lobster fibriongen reveals common ancestry with vitellogenin." Biochemical and Biophysical Research Communications. 167: 16-19.

Xu, X., and Doolittle, R. F., (1990) "Presence of a vertebrate fibrinogen-like sequence in an echinoderm." Proceedings of the National Academy of Sciences (USA) 87: 2097-2101.

Referência desse artigo:

Miller, K. R. (n.d.). The Evolution of Vertebrate Blood Clotting. Retrieved from http://www.millerandlevine.com/km/evol/DI/clot/Clotting.html

Importante notar que a página não especifica uma data de publicação. O artigo faz parte do rascunho original do livro Finding Darwin's God, de Kenneth R. Miller, publicado em 1999 (ISBN: 0060175931) e republicado em 2007 (ISBN: 9780061233500).